Електрофореза шта је то, чему служи и како се ради

Електрофореза је лабораторијска техника која се врши с циљем одвајања молекула према њиховој величини и електричном набоју тако да се може поставити дијагноза болести, верификовати експресију протеина или идентификовати микроорганизме.

Електрофореза је једноставан и јефтин поступак, који се користи у лабораторијским рутинама и у истраживачким пројектима. У складу са сврхом електрофорезе, можда ће бити потребно да се изврше и други тестови и испитивања како би се постигла дијагноза, на пример.

За шта је то

Електрофореза се може извести у различите сврхе, како у истраживачким пројектима, тако и у дијагностици, јер је то једноставна и јефтина техника. Дакле, електрофореза се може извести за:

Идентификујте вирусе, гљивице, бактерије и паразите, при чему је ова апликација чешћа у истраживачким пројектима;
Тест очинства;
Проверите експресију протеина;
Препознати мутације, на пример, у дијагностици леукемије;
Анализирајте врсте циркулирајућег хемоглобина, корисне у дијагностици анемије српастих ћелија;
Процените количину протеина присутних у крви.

У складу са сврхом електрофорезе, можда ће бити потребно урадити и друге комплементарне тестове да би лекар завршио дијагнозу.

Како се то ради

За електрофорезу је потребан гел који може бити од полиакриламида или агарозе у зависности од циља, пуфера за електрофорезу и каде, маркера молекулске тежине и флуоресцентне боје, поред опреме за УВ или ЛЕД светлост, такође познат и као трансиллуминатор.

Након припреме гела, посебан предмет се мора поставити тако да се јажице направе у гелу, популарно названом чешаљ, и пусте гел да се постави. Кад је гел спреман, нанесите га на јажице. Да би се то постигло, у једну од јажица се мора поставити маркер молекуларне тежине, позитивна контрола, која је супстанца која се зна шта је, негативна контрола, која гарантује валидност реакције, и узорци који се анализирају. Сви узорци морају бити помешани са флуоресцентном бојом, јер је на овај начин могуће визуелно приказати траке на трансиллуминатору.

Гел са узорцима мора бити смештен у посуду за електрофорезу, која садржи специфични раствор пуфера, а затим се уређај укључује тако да постоји електрична струја, а самим тим и разлика потенцијала, што је важно за одвајање честице према њиховом оптерећењу и величини. Електрофоретско време рада варира у зависности од циља поступка и може трајати до 1 сат.

Након одређеног времена, могуће је прегледати резултат електрофоретског проласка кроз трансиллуминатор. Када се гел стави под УВ или ЛЕД светлост, могуће је визуелно приказати образац везивања: што је већи молекул, то је мања његова миграција, што се ближи бушотини, док је лакши молекул, већи је миграторни потенцијал.

Да би се реакција потврдила, неопходно је да се појасеви позитивне контроле визуализују и да се у негативној контроли ништа не визуализује, јер је у супротном показатељ да је дошло до контаминације, а цео процес се мора поновити.

Врсте електрофорезе

Електрофореза се може извести у различите сврхе и, према својој намјени, може се користити више врста гела, од којих је најчешћи полиакриламид и агароза.

Електрофореза за идентификацију микроорганизама чешће се изводи у истраживачким лабораторијама, међутим, у дијагностичке сврхе електрофореза се може користити за идентификацију хематолошких болести и болести које се развијају порастом количине протеина, а то су главне врсте електрофорезе :

1. Електрофореза хемоглобина

Електрофореза хемоглобина је лабораторијска техника која се врши ради идентификовања различитих врста хемоглобина који циркулише у крви, што омогућава идентификацију болести повезаних са синтезом хемоглобина. Тип хемоглобина је идентификован електрофорезом са специфичним пХ, идеално између 8,0 и 9,0, при чему се верификује узорак трака који се може упоредити са нормалним узорком, омогућавајући идентификацију присутности ненормалних хемоглобина.

За шта је направљено: Електрофореза хемоглобина се изводи ради испитивања и дијагностиковања болести повезаних са синтезом хемоглобина, као што су анемија српастих ћелија и болест хемоглобина Ц, поред тога што је корисна у диференцијацији таласемије. Научите како тумачити електрофорезу хемоглобина.

2. Електрофореза протеина

Електрофореза протеина је преглед који лекар тражи да процени количину протеина који циркулише у крви и на тај начин да идентификује болести. Овај тест се врши из узорка крви који је центрифугиран да би се добила плазма, део крви који се између осталог састоји од протеина.

Након електрофорезе може се визуелизовати узорак трака и, потом, графикон у коме је назначена количина сваке фракције протеина, која је основна за дијагнозу.

За шта је направљено: Електрофореза протеина омогућава лекару да истражи појаву мултиплог мијелома, дехидратацију, цирозу, упалу, болест јетре, панкреатитис, лупус и хипертензију према обрасцу траке и графикону представљеном у извештају о прегледу.

Схватите како се то ради и како разумети резултат електрофорезе протеина.